MACS磁珠分選免疫細胞分離生物學

MACS磁珠分選免疫細胞分離生物學

一、免疫磁珠法分離細胞原理

免疫磁珠法分離細胞是基于細胞表面抗原能與連接有磁珠的特異性單抗相結合，在外加磁場中，通過抗體與磁珠相連的細胞被吸附而滯留在磁場中，無該種表面抗原的細胞由于不能與連接著磁珠的特異性單抗結合而沒有磁性，不在磁場中停留，從而使細胞得以分離。

二、MACS微珠（MicroBeads）

MACS微珠是一種與高度特異性單克隆抗體相偶聯的超順磁化微粒，用于目的細胞分離或者去除細胞的磁性標記。微珠直徑約有50nm，比細胞小200多倍，體積為細胞的百萬分之一，光學顯微鏡下不可見。微珠由多聚糖和氧化鐵組成，無毒性，對細胞無損傷，可以生物降解。MACS微珠與流式細胞儀兼容，不會影響細胞的光散射特性；磁性標記只占用20－30％的結合位點，不影響細胞的熒光抗體標記。此外，MACS微珠可以大限度地避免細胞活化；無需解離磁珠，可以直接進行后續實驗：如流式細胞儀分析或分選、細胞培養、分子生物學研究、回輸給人或者動物。

MACS微珠主要有三種：直標微珠、間標微珠、多選微珠。其中間標微珠有抗免疫球蛋白微珠、抗生物素微珠或鏈霉親和素微珠、抗熒光素微珠。多選微珠是專門為分選細胞亞群而研制的一種微珠。這種微珠通過特殊的方式與抗體偶聯，在一次陽性分選完成后，與細胞結合的多選微珠可以被解離試劑剪切下來，陽性分選的細胞可以進行再次陽性分選或者去除分選。

三、MACS分選柱（Separation Column） 

MACS分選柱是一類填充有不同規格鐵珠的塑料容器，鐵珠表面有親水包被，因此不會損傷細胞。在磁場外MACS分選柱不帶有磁性，但是當置于一個磁場—MACS分選器中時，分選柱內的鐵珠可以使分選器的磁場增強1000倍，足以滯留僅標記有極少量微珠的目的細胞；磁性標記細胞從分選柱中通過時可以受到均勻的磁力作用，從而提高分選純度和回收率。手動操作在30分鐘內可完成，自動分選僅需2.5-10分鐘，得到的細胞可立即用于后續實驗。此外，大多數MACS分選柱都是無菌包裝，一次性使用，可以滿足細胞培養所需的無菌條件。

四、MACS分選器（MACS Separators） 

MACS分選器由磁鐵和支架構成。與分選柱一起組成高強度的梯度磁場。根據應用范圍分為研究用和臨床應用的MACS分選器，根據操作方式分為手動和自動分選器。

1、MiniMACS分選器和OctoMACS分選器

MiniMACS分選器是專為手動分選動、植物細胞，細菌、病毒、細胞器和mRNA等分子而設計的。該設備價格低廉，快速分選，應用廣泛，易于操作，是獲得少量高純度細胞的理想設備。OctoMACS分選器把8個MiniMACS分選器連在一起，可以在一臺儀器上同時進行8個標本的分選。

  
 2、MidiMACS分選器和QuadroMACS分選器

MidiMACS分選器是MiniMACS分選器的擴大版本，與LS和LD分選柱配合使用，可陽性選擇或者去除大量高純度細胞。QuadroMACS分選器把4個MidiMACS分選器連在一起，可以同時進行多個分選過程，或者同時進行多個樣本分選，也可將一個大的樣本分成數個部分同時分選。

3、VarioMACS分選器

VarioMACS分選器有多種適配器，可以使用MS、LS、LD和CS分選柱?？捎糜陉栃赃x擇和去除分選：既可高純度地分選出稀有細胞，也可用來從細胞懸液中去除多達2×108非目的細胞。

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