T0P10感受態細胞

T0P10感受態細胞
產品貨名：*0 Chemically Competent Cell
產品貨號：G6015-20(20支100ul)、G6015-100(100支100ul)
規格/簡介：G6015-20(20支100ul)、G6015-100(100支100ul)

基因型

F- mcrA△(mrr-hsdRMS- -mcrBC) φ80 lacZ △M15△lacX74 recAl ara△139△(ara-leu)7697 galU galK rpsL (StrR) endA1 nupG

簡要說明：

T0P10菌株來源于MC1061菌株，是目前實驗室常用的感受態細胞之一，基因型與DH10B高度類似(DH10B為galE15型， 而T0P10為galU型)。CLBio *0生長速度快(比DH5a快，但比Mach1-T1生長速度慢)，10小時可見克隆，recA1和 endA1的突變有利于插入DNA的穩定和高純度質粒DNA的提取?？捎糜跇嫿寺?，藍白斑篩選等實驗，具有鏈霉素抗性。CLBio系列T0P10感受態細胞經特殊工藝制作，經pUC19質粒檢測轉化效率>108cfu/ μg。

操作說明：

1. CLBio *0感受態細胞放置冰中融化(或放手心或室溫片刻，待菌體處于冰水混合狀態時迅速插入冰中)，加入目的DNA (質?；蜻B接產物)并用手打EP管底輕輕混勻，冰上靜置25分鐘。

2.42°C水浴熱激45秒,迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。

3.向離心管中加入700 μ 1不含抗生素的2YT或LB無菌培養基，混勻后37°C，200 rpm復蘇60分鐘。

4.5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μ 1左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養基上。

5.將平板倒置放于37°C培養箱過夜培養。如果進行藍白斑篩選操作，將平板放37°C培養至少13h.

注意事項：

1. CLBio感受態細胞建議在冰上融化。冰上放置大約5分鐘即可融化，融化后8分鐘內加入質粒，否則會影響轉化效率。

2.混入質?；蜻B接產物時應輕柔操作。

3.轉化高濃度的質?；蚋咝实倪B接產物可相應減少終用于涂板的菌量。